Trong việc xác định sự khác biệt giữa vi khuẩn đường ruột và một số vi khuẩn Vibrio, phản ứng Voges-Proskauer chiếm một vị trí đặc biệt. Thử nghiệm dựa trên khả năng vi khuẩn lên men glucose để tạo thành acetoin.
Bản chất của quá trình nghiên cứu
Trong vi sinh vật học, phản ứng Voges-Proskauer thường được sử dụng để phân biệt các vi khuẩn đường ruột thuộc họ Yersinia (bao gồm các mầm bệnh của bệnh lao và viêm ruột), Escherichia coli và các vi khuẩn hiếu khí hình thành bào tử. Kết quả được hiển thị bằng cách tạo màu cho môi trường khi thêm một số thuốc thử nhất định.
Bài kiểm tra này thuộc dòng IMViC (viết tắt của Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - một nhóm các bài kiểm tra nhận dạng bao gồm các định nghĩa khác biệt:
- với indole, dựa trên sự phân hủy tryptophan thành indole, được sử dụng khi có thuốc thử Kovacs hoặc Ehrlich;
- sử dụngmetylroth, hoặc metyl đỏ, phát hiện độ pH nhất định là kết quả của quá trình chuyển hóa glucose;
- Phản ứng Voges-Proskauer để phát hiện acetyl-metylcarbinol;
- sử dụng citrate với sự thay đổi màu sắc do kiềm hóa môi trường.
Bản chất của quá trình là hình dung sự hiện diện của vi khuẩn được chẩn đoán do sự tương tác của acetoin do chúng tạo thành với kali ăn da khi có oxy. Acetyl-metylcarbinol bị oxy hóa thành diacetyl, tạo thành hợp chất có màu đỏ tươi hoặc hồng. Tăng độ nhạy của thử nghiệm bằng cách đưa vào alpha-naphthol trước khi thêm kali ăn da.
Cài đặt thử nghiệm
Công thức của phản ứng Voges-Proskauer liên quan đến việc nuôi cấy sơ bộ vi sinh vật. Môi trường nuôi cấy thuần khiết được gieo trên môi trường chẩn đoán phân biệt của Clark, một biến thể của môi trường này là môi trường nuôi cấy của Clark (không bổ sung agar-agar). Môi trường làm sẵn được sử dụng hoặc được chuẩn bị độc lập. Thành phần bao gồm:
- 5g peptone;
- 5g glucose;
- 5g kali photphat bazơ;
- 1L chưng cất.
Trong quá trình nghiên cứu, mẫu cấy được cấy vòng lặp vi khuẩn vô trùng vào môi trường lỏng. Số lượng - 5 ml trong ống nghiệm cộng với đối chứng. Ủ được thực hiện ở nhiệt độ 35-37 độ trong hai ngày. Tiếp theo, một nghiên cứu về phản ứng Voges-Proskauer được thực hiện theo các giai đoạn:
- 2, 5 ml dịch nuôi cấy được chuyển vào một ống vô trùng.
- Thêm sáu giọt alpha-naphthol (dung dịch cồn 5%).
- Thêm 40%dung dịch kali ăn da với lượng 0,1 ml hoặc hai giọt.
- Khuấy được thực hiện bằng cách lắc nhẹ ống nghiệm.
- Đánh giá kết quả sau 15 phút kể từ khi bắt đầu thử nghiệm.
Một phương pháp thử nghiệm thay thế là ủ qua đêm, thời gian giảm xuống còn 18 giờ hoặc tối đa một ngày. Ngoài phương pháp này, một phép thử nhanh cũng được sử dụng: chất nuôi cấy được đưa vào một vòng lặp vào 2 ml môi trường, ủ trong khoảng bốn giờ, sau đó thuốc thử được thêm vào với một lượng tương đương 2-3 giọt, trộn đều và kết quả được đánh giá sau mười phút.
Việc kiểm soát là một trong những tác nhân gây bệnh viêm phổi Klebsiella pneumoniae - chủng atcc 13883.
Đánh giá kết quả
Sau thời gian cần thiết sau khi thêm thuốc thử (từ 5 đến 15 phút), màu đỏ anh đào sẽ được quan sát với phản ứng dương tính rõ rệt, màu đỏ và hồng - với phản ứng dương tính yếu. Không có thay đổi nào được ghi nhận là kết quả âm tính.
Quá nhiều kali ăn da trong một dung dịch có thể tạo ra phản ứng dương tính giả, nhuộm màu đồng. Trong trường hợp này, phản ứng âm tính của khuẩn lạc được thử nghiệm phải được ghi lại. Ngoài ra, màu đồng xuất hiện trong trường hợp đánh giá được đưa ra một giờ sau khi đưa thuốc thử vào.
Khi đánh giá kết quả, phải lưu ý rằng việc nuôi cấy vi sinh vật được nghiên cứu kéo dài (hơn ba ngày) dẫn đến axit hóa môi trường, có thể dẫn đến kết quả nghiên cứu không chính xác. Phản ứng có thể dương tính nhẹ hoặcâm tính giả.
Yêu cầu đối với thuốc thử thử nghiệm
Thuốc thửVoges-Proskauer phải đáp ứng các yêu cầu như nồng độ chính xác, độ tinh khiết cao và ổn định, đạt được khi bảo quản thích hợp.
Bộ dụng cụ thử nghiệm sẵn sàng sử dụng thường chứa thuốc thử cho 100 lần sử dụng trở lên và có trong lọ nhựa hoặc thủy tinh màu. Chất lượng được quy định bởi các tài liệu liên quan.
